Вакуумные пробирки для выделения моноцитов и лимфоцитов

Вакуумные пробирки для выделения моноцитов и лимфоцитов - это специальные пробирки, которые позволяют отделить мононуклеарные клетки периферической крови в один прием, за 20 минут центрифугирования, при этом цельная кровь набирается, центрифугируется и обрабатывается в одной первичной пробирке. Внутренние стенки пробирок покрыты силиконом для минимизации неспецифической активации клеток.

Вакуумные пробирки для выделения моноцитов и лимфоцитов содержат:

• антикоагулянт (натрия цитрат или натрия гепарин);
• разделительный гель;
• специальную жидкость фиколл, создающую градиент плотности, для разделения мононуклеаров.

Вакуумные пробирки для выделения моноцитов и лимфоцитов выпускаются двух видов с сине-черной пестрой пробкой (пробирки с натрия цитратом) и с красно-зеленой пестрой пробкой (пробирки натрия гепарином).

В практике КДЛ вакуумные пробирки для выделения моноцитов и лимфоцитов применяют в целях исследования:

• количественных и функциональных характеристик мононуклеарных клеток;
• пролиферативной активности мононуклеарных клеток;
• РНК/ДНК клеток и вирусов;
• обнаружения злокачественных новообразований;
• HLA-типирования;
• генетических маркеров;
• провирусной ДНК ВИЧ, РНК ВИЧ и др. вирусов.

Преимущества использования вакуумных пробирок для выделения моноцитов и лимфоцитов:

• значительно облегчается процесс отделения мононуклеарных клеток, экономится время лаборанта и повышается эффективность работы лаборатории;
• гарантируется стандартизация процесса отделения мононуклеарных клеток, повышается точность исследований при использовании образцов, доставленных из различных ЛПУ;
• снижается вероятность ошибок, которые происходят при отделении мононуклеарных клеток вручную.

Взятие образца и пробоподготовка

1. Кровь в вакуумные пробирки для выделения моноцитов и лимфоцитов берется из вены с помощью вакуумной системы.
2. Так как в пробирке содержится химический наполнитель, то нужно обращать особое внимание на предотвращение обратного тока крови: во время взятия крови рука пациента должна находиться в опущенном состоянии, пробирку необходимо поддерживать в вертикальном положении и контролировать, чтобы содержимое пробирки не касалось крышки и мембраны иглы.
3. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя кровь необходимо тщательно перемешать с антикоагулянтом, для этого пробирку следует аккуратно перевернуть 8­10 раз. Нельзя встряхивать пробирку, так как это может вызвать пенообразование и гемолиз.
4. Пробу крови до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.
5. Центрифугировать пробу крови нужно в строго течение 20 минут в горизонтальной центрифуге при относительной центробежной силе 1500-1800 g. Меньшее время и/или относительная центробежная сила отрицательно сказывается на эффективности действия пробирки. Большее время и/или относительная центробежная сила может привести к уменьшению выхода моноядерных клеток. Во время центрифугирования формируется устойчивый гелевый барьер между слоем беловатого цвета, содержащим мононуклеарные клетки, распределенные в градиенте плотности над гелем, и слоем эритроцитов и гранулоцитов под гелем.

После центрифугирования моноядерные клетки можно транспортировать и хранить непосредственно в первичной пробирке, в этом случае плазма служит для клеток питательной средой. В таком виде мононуклеарные клетки могут храниться до 48 часов при комнатной температуре. Нужно учитывать, что точное время хранения определяется типом проводимого исследования. Для максимального выхода мононуклеарных клеток закрытую пробирку нужно сразу же после центрифугирования аккуратно перевернуть 5-10 раз, чтобы равномерно распределить клетки в плазме. Гелевый барьер при этом не нарушается. Затем суспензию плазмы и клеток над гелевым барьером следует осторожно перелить или перенести пипеткой во вторичную пробирку для промывания клеток и добавить в нее буферный раствор, доведя общий объем до 15 мл. Нельзя использовать буферы, содержащие кальций и/или магний. При промывании клеток следует придерживаться стандартного протокола, принятого в лаборатории. Если помимо анализа моноядерных клеток необходимо провести дополнительное исследование плазмы, ее нужно осторожно отобрать пипеткой над поверхностью клеточного слоя, а затем добавить в вакуумную пробирку 3-5 мл буферного раствора для промывания клеток.