Пробы крови

Основным видом биологического материала, который подвергается анализу, является кровь. Кровь состоит из клеток (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты) и жидкой части, которая представляет собой раствор многих неорганических и органических веществ. Эта и есть та жидкость, которую анализируют в большинстве лабораторных тестов. Поэтому первым этапом после взятия проб крови и перед отправкой их в лабораторию, является отделение жидкой части крови от клеток путем центрифугирования проб. Жидкая часть крови, которую получают после центрифугирования, может быть плазмой или сывороткой.

ПРОБЫ КРОВИ

1. Цельная кровь

Цельная кровь - проба венозной, артериальной или капиллярной крови в которой концентрация и свойства клеточных и внутриклеточных компонентов остаются относительно неизмененными по сравнению с состоянием in vivo. Добавление антикоагулянтов в пробу цельной крови стабилизирует клеточные и внутриклеточные компоненты на определенный период времени.

2. Сыворотка

Сыворотка - неразделенная внеклеточная часть крови после завершения адекватного процесса свертывания крови. Для отделения сыворотки от клеток крови в пробе крови, взятой у пациента, вакуумную пробирку следует оставить при комнатной температуре в течение, по меньшей мере 30 мин. Для получения качественной пробы важно выдержать полное время свертывания крови. Этот период может быть короче в случае использования активатора свертывания.

Преимущества использования сыворотки по сравнению с плазмой обусловлено тем, что добавление антикоагулянтов может вызывать интерференцию с некоторыми аналитическими методами лабораторного анализа или изменять концентрацию определяемых компонентов:

• примесь катионов в антикоагулянтах: NH⁴⁺, Li⁺, Na⁺, K⁺;

• интерференция аналитов, вызванная связываем металлов с ЭДТА и цитратом (например, снижение активности щелочной фосфатазы при связывании цинка, снижение активности металлопротеиназ, угнетение металлозависимой активации клеток при функциональных тестах, связывание ионизированного кальция гепарином);

• интерференция фибриногена в гетерогенных иммунных исследованиях;

• ингибирование метаболических или каталитических реакций гепарином (например, Taq полимеразы в полимеразной цепной реакции);

• интерференция ЭДТА, цитрата с распределением ионов между внутри- и межклеточными пространствами (например, Cl^-, NH⁴+);

• электрофорез белков следует проводить только в сыворотке.

Интерференция - вмешательство постороннего фактора в результаты анализа.

3. Плазма

Если в вакуумную пробирку (вакутейнер) с пробой крови добавлен антикоагулянты, кровь остается жидкой (не сворачивается) и получаемая после центрифугирования жидкая часть, называется плазмой.

Преимущества использования плазмы:

• экономия времени: пробы крови могут быть отцентрифугированы сразу после их получения (нет необходимости ждать не менее 30 минут для получения сыворотки);

• выход плазмы из одного и того же объема крови на 15-20% больше, чем сыворотки;

• предотвращение, вызванной свертываем интерференции при использовании сыворотки.

Вследствие вызванных свертыванием крови в вакумной пробирке изменений некоторые исследования дают достоверные результаты, только при использовании плазмы (например, нейроспецифическая енолаза, серотонин, аммиак).

АНТИКОАГУЛЯНТЫ

Антикоагулянты - это добавки, которые тормозят процесс свертывания крови и/или плазмы, что обеспечивает отсутствие существенных изменений исследуемых компонентов перед аналитическим процессом.

1. ЭДТА
2. Цитрат
3. Гепарин
4. Гирудин

Свертывание крови предотвращается путем связывания ионов кальция (ЭДТА, цитрат натрия) или торможением активности тромбина (гепарин, гирудин). Твердые или жидкие антикоагулянты, находящиеся в вакуумных пробирках должны быть смешены с кровью немедленно после взятия проб крови.

1. ЭДТА

ЭДТА - соль этилендиаминтетрауксусной кислоты. Используют двукалиевую (К₂), трикалиевую (К₃) и двунатриевую (Na₂) соли. Концентрации: от 1,2 до 2,0 мг/мл крови (от 4,1 до 6,8 ммоль/л крови) из расчета безводной ЭДТА. Для гематологических исследований предпочтительно использовать вакуумные пробирки с К₂ ЭДТА, так как он обеспечивает большую стабильность размера клеток крови и не разбавляет образец.

2. Цитрат

В вакуумных пробирках для исследования системы гемостаза используется жидкий трехзамещенный цитрат натрия (дигидротринатрия цитрат Na₃C₆H₅O₇*2H₂O) в концентрации:

• 0,105 моль/л; 3,13% (31,3 г/л);

• 0,109 моль/л; 3,20% (32,0 г/л);

• 0,129 моль/л; 3,80% (38,0 г/л).

Согласно рекомендациям ВОЗ и Национального комитета по стандартизации в клинической лаборатории (США) предпочтительнее использовать 0,109 моль/л (3,20%) тринатрийцитрат лимонной кислоты. Для исследования показателей системы гемостаза рекомендуется смесь одной части цитрата с 9 частями крови.

Для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) используют 0,105 моль/л (3,13%) тринатрийцитрат лимонной кислоты. При исследовании СОЭ смешивают одну часть цитрата с 4 частями крови.

В целях обеспечения стабильности образцов крови для исследования показателей гемостаза в вакуумных пробирках используются комплексные наполнители (цитрат натрия/теофиллин,/аденозин/дипиридамол) Пробирки с этим наполнителем используют для обычных рутинных тестов, мониторинга терапии гепарином, анализе антигепаринового фактора тромбоцитов 4, β-тромбомодулина. Пробирки с комплексным наполнителем нельзя использовать для исследования агрегации тромбоцитов. Соотношение антикоагулят/кровь в этих пробирках 1:9 при концентрации цитрат натри 0,109 моль/л (3,20%). Вакуумные пробирки с комплексным наполнителем рекомендуются при централизации исследований системы гемостаза.

3. Гепарин

Для получения стандартизованной гепаринизированной плазмы рекомендуется от 12 до 30 международных единиц (МЕ)/мл нефракционированной натриевой, литиевой или аммиачной соли гепарина с молекулярной массой от 3 до 30 кД.

Титрованный по кальцию гепарин при концентрации от 40 до 60 МЕ/мл (сухая гепаринизация) и от 8 до 12 МЕ/мл крови (жидкая гепаринизация) рекомендуется для определения ионизированного кальция.

4. Гирудин

Гирудин представляет собой антитромбин, экстрагированный из пиявок или полученный с помощью генно-инженерного синтеза. Гирудин тормозит тромбин, образуя комплекс гирудин- тромбин в соотношении 1:1. Используется в концентрации 10 мг/л.

ЦВЕТОВАЯ КОДИРОВКА ВАКУУМНЫХ ПРОБИРОК С АНТИКОАГУЛЯНТАМИ

В стандарте ИСО 6710 представлены следующие цветовые коды антикоагулянтов:

• ЭДТА - сиреневый/красный;

• цитрат для исследования системы гемостаза - бледно голубой/зеленый;

• цитрат для СОЭ - черный/розовато лиловый;

• гепарин - зеленый/оранжевый;

• без добавок (для получения сыворотки) - красный/белый.

Цветовая кодировка крышек вакуумных пробирок соответствует цветовым кодам, используемых в них антикоагулянтов.