Вы здесь
Пробы крови
Основным видом биологического материала, который подвергается анализу, является кровь. Кровь состоит из клеток (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты) и жидкой части, которая представляет собой раствор многих неорганических и органических веществ. Эта и есть та жидкость, которую анализируют в большинстве лабораторных тестов. Поэтому первым этапом после взятия проб крови и перед отправкой их в лабораторию, является отделение жидкой части крови от клеток путем центрифугирования проб. Жидкая часть крови, которую получают после центрифугирования, может быть плазмой или сывороткой.
1. Цельная кровь
Цельная кровь - проба венозной, артериальной или капиллярной крови в которой концентрация и свойства клеточных и внутриклеточных компонентов остаются относительно неизмененными по сравнению с состоянием in vivo. Добавление антикоагулянтов в пробу цельной крови стабилизирует клеточные и внутриклеточные компоненты на определенный период времени.
2. Сыворотка
Сыворотка - неразделенная внеклеточная часть крови после завершения адекватного процесса свертывания крови. Для отделения сыворотки от клеток крови в пробе крови, взятой у пациента, вакуумную пробирку следует оставить при комнатной температуре в течение, по меньшей мере 30 мин. Для получения качественной пробы важно выдержать полное время свертывания крови. Этот период может быть короче в случае использования активатора свертывания.
Преимущества использования сыворотки по сравнению с плазмой обусловлено тем, что добавление антикоагулянтов может вызывать интерференцию с некоторыми аналитическими методами лабораторного анализа или изменять концентрацию определяемых компонентов:
-
примесь катионов в антикоагулянтах: NH4+, Li+, Na+, K+;
-
интерференция аналитов, вызванная связываем металлов с ЭДТА и цитратом (например, снижение активности щелочной фосфатазы при связывании цинка, снижение активности металлопротеиназ, угнетение металлозависимой активации клеток при функциональных тестах, связывание ионизированного кальция гепарином);
-
интерференция фибриногена в гетерогенных иммунных исследованиях;
-
ингибирование метаболических или каталитических реакций гепарином (например, Taq полимеразы в полимеразной цепной реакции);
-
интерференция ЭДТА, цитрата с распределением ионов между внутри- и межклеточными пространствами (например, Cl-, NH4+);
-
электрофорез белков следует проводить только в сыворотке.
Интерференция - вмешательство постороннего фактора в результаты анализа.
3. Плазма
Если в вакуумную пробирку (вакутейнер) с пробой крови добавлен антикоагулянты, кровь остается жидкой (не сворачивается) и получаемая после центрифугирования жидкая часть, называется плазмой.
Преимущества использования плазмы:
-
экономия времени: пробы крови могут быть отцентрифугированы сразу после их получения (нет необходимости ждать не менее 30 минут для получения сыворотки);
-
выход плазмы из одного и того же объема крови на 15-20% больше, чем сыворотки;
-
предотвращение, вызванной свертываем интерференции при использовании сыворотки.
Вследствие вызванных свертыванием крови в вакумной пробирке изменений некоторые исследования дают достоверные результаты, только при использовании плазмы (например, нейроспецифическая енолаза, серотонин, аммиак).
Антикоагулянты - это добавки, которые тормозят процесс свертывания крови и/или плазмы, что обеспечивает отсутствие существенных изменений исследуемых компонентов перед аналитическим процессом.
- ЭДТА
- Цитрат
- Гепарин
- Гирудин
Свертывание крови предотвращается путем связывания ионов кальция (ЭДТА, цитрат натрия) или торможением активности тромбина (гепарин, гирудин). Твердые или жидкие антикоагулянты, находящиеся в вакуумных пробирках должны быть смешены с кровью немедленно после взятия проб крови.
1. ЭДТА
ЭДТА - соль этилендиаминтетрауксусной кислоты. Используют двукалиевую (К2), трикалиевую (К3) и двунатриевую (Na2) соли. Концентрации: от 1,2 до 2,0 мг/мл крови (от 4,1 до 6,8 ммоль/л крови) из расчета безводной ЭДТА. Для гематологических исследований предпочтительно использовать вакуумные пробирки с К2 ЭДТА, так как он обеспечивает большую стабильность размера клеток крови и не разбавляет образец.
2. Цитрат
В вакуумных пробирках для исследования системы гемостаза используется жидкий трехзамещенный цитрат натрия (дигидротринатрия цитрат Na3C6H5O7*2H2O) в концентрации:
-
0,105 моль/л; 3,13% (31,3 г/л);
-
0,109 моль/л; 3,20% (32,0 г/л);
-
0,129 моль/л; 3,80% (38,0 г/л).
Согласно рекомендациям ВОЗ и Национального комитета по стандартизации в клинической лаборатории (США) предпочтительнее использовать 0,109 моль/л (3,20%) тринатрийцитрат лимонной кислоты. Для исследования показателей системы гемостаза рекомендуется смесь одной части цитрата с 9 частями крови.
Для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) используют 0,105 моль/л (3,13%) тринатрийцитрат лимонной кислоты. При исследовании СОЭ смешивают одну часть цитрата с 4 частями крови.
В целях обеспечения стабильности образцов крови для исследования показателей гемостаза в вакуумных пробирках используются комплексные наполнители (цитрат натрия/теофиллин,/аденозин/дипиридамол) Пробирки с этим наполнителем используют для обычных рутинных тестов, мониторинга терапии гепарином, анализе антигепаринового фактора тромбоцитов 4, β-тромбомодулина. Пробирки с комплексным наполнителем нельзя использовать для исследования агрегации тромбоцитов. Соотношение антикоагулят/кровь в этих пробирках 1:9 при концентрации цитрат натри 0,109 моль/л (3,20%). Вакуумные пробирки с комплексным наполнителем рекомендуются при централизации исследований системы гемостаза.
3. Гепарин
Для получения стандартизованной гепаринизированной плазмы рекомендуется от 12 до 30 международных единиц (МЕ)/мл нефракционированной натриевой, литиевой или аммиачной соли гепарина с молекулярной массой от 3 до 30 кД.
Титрованный по кальцию гепарин при концентрации от 40 до 60 МЕ/мл (сухая гепаринизация) и от 8 до 12 МЕ/мл крови (жидкая гепаринизация) рекомендуется для определения ионизированного кальция.
4. Гирудин
Гирудин представляет собой антитромбин, экстрагированный из пиявок или полученный с помощью генно-инженерного синтеза. Гирудин тормозит тромбин, образуя комплекс гирудин- тромбин в соотношении 1:1. Используется в концентрации 10 мг/л.
ЦВЕТОВАЯ КОДИРОВКА ВАКУУМНЫХ ПРОБИРОК С АНТИКОАГУЛЯНТАМИ
В стандарте ИСО 6710 представлены следующие цветовые коды антикоагулянтов:
-
ЭДТА - сиреневый/красный;
-
цитрат для исследования системы гемостаза - бледно голубой/зеленый;
-
цитрат для СОЭ - черный/розовато лиловый;
-
гепарин - зеленый/оранжевый;
-
без добавок (для получения сыворотки) - красный/белый.
Цветовая кодировка крышек вакуумных пробирок соответствует цветовым кодам, используемых в них антикоагулянтов.