Вы здесь

Анализ кала на цисты и вегетативные формы простейших

Исследование кала на простейшие - это универсальный метод диагностики кишечных протозоонозов при эпидемиологических и диагностических осмотрах населения. Используется для выявления наличия цист и ооцист простейших кишечника.

Простейшие кишечника принадлежат к типу Protozoa. Характерной особенностью этого типа является то, что на всех этапах жизненного цикла они существуют в виде одной клетки. В жизненном цикле проходят две стадии: вегетативную – стадию трофозоида (активную, подвижную, размножающуюся, питающуюся) и стабильную стадию – цисты.

Анализ кала на цисты и вегетативные формы простейших – это микроскопическое исследование, которое используется для поиска паразитов, инфицирующих нижние отделы пищеварительного тракта, откуда они попадают в стул. Берётся тонкий мазок стула на предметном стекле, который затем окрашивается, после чего паразиты в виде вегетативных форм или цист могут быть обнаружены.

Анализ кала на простейшие и яйца гельминтов показан для диагностики ряда заболеваний:

  • амебиаза (Entamoeba histolytica) — дизентерийная амеба поражает толстую кишку, печень,
  • лямблиоза (Lamblia intestinalis) — приводит к нарушению кишечной функции: диарее, возможно также бессимптомное носительство; если простейший паразит попадает в желчевыводящие пути, то развивается холецистит и холангит,
  • балантидиаза (Balantidium coli) — инфузория приводит к язвенному поражению толстого кишечника с дизентериеподобным синдромом,
  • прочих гельминтозов.

Обнаружение и дифференцирование про­стейших - один из наиболее сложных разделов исследования испражнений. Отличие патоген­ных форм простейших от непатогенных требует известного опыта и тщательности в работе.

Здесь следует учитывать, что большинство этих одноклеточных организмов встречается в двух формах: вегетатив­ной - активной, подвижной, жизнедеятельной, легко поддающейся вредным воздействиям (в частности, охлаждению) и потому быстро поги­бающей после выделения из кишечника, и в виде устойчивых к внешним воздействиям цист. Существование вегетативных форм требует более или менее жидкой среды, поэтому они обнаруживаются преимущественно в жидком, полужидком, слизистом кале. При неблаго­приятных условиях для их жизнедеятельности (например, уплотнение каловых масс) они пре­вращаются в цисты. В оформленном кале простейшие, как правило, встречаются лишь в инцистированном состоянии.

Кал для отыскания в нем вегетативных форм должен исследоваться сразу после его выделе­ния, еще в теплом состоянии. Необходимость этого вызывается двумя причинами. Во-первых, в остывшем кале вегетативные формы простей­ших быстро гибнут и мертвыми быстро под­даются действию протеолитических ферментов. Вследствие этого они сначала теряют характер­ные особенности своей структуры, позволяющие отличать патогенные формы от непатогенных, а затем и совсем растворяются. Во-вторых, при остывании уменьшается, а затем исчезает по­движность простейших - важный вспомога­тельный фактор при их дифференцировании.

Следует заметить, что сохранение кала в термостате не допускается, так как в условиях искусственного подогревания простейшие очень быстро подвергаются дегенеративным измене­ниям, затрудняющим их распознавание.

В оформленном кале, как правило, встре­чаются только цисты, однако в комках слизи, находящихся на его поверхности, иногда можно найти и вегетативные формы. Поэтому опреде­ление вегетативных форм простейших, находя­щихся в слизи, следует производить по возмож­ности быстро.

Иногда для обнаружения простейших, особенно амеб, используют материал, получен­ный при ректороманоскопии. В этих случаях особенно нужно помнить о необходимости пра­вильного обращения с полученным незначитель­ным количеством материала. За время транспорти­ровки в лабораторию, расположенную даже в том же здании, эта капля успевает остыть, а иногда и высохнуть. Поэтому лучше всего под­готовить все необходимое для исследования в том же помещении, где проводится эндоскопия. Смазывания ректоскопа вазелиновым маслом или жиром делают последующую микроскопию затруднительной.

Для обнаружения в кале простейших прибе­гают к ряду методов. Трудности, сопряженные с обнаружением цист простейших, могут быть в известной степени преодолены путем примене­ния методов концентрации. Культивирование простейших и заражение ими животных, приме­няемые в основном с научными целями, ввиду сложности методики малопригодны в повседнев­ной практической работе. Выделение простей­ших с калом происходит непостоянно. Поэтому не следует ограничиваться при их поисках однократным исследованием. Последнее нужно повторить 4-5 раз через 2-3 дня.

Унифицированные методы определения про­стейших с помощью нативного мазка н мазка с раствором Люголя.

Принцип. Движущиеся простейшие обнаруживаются при исследовании суспензии каловых масс в изото­ническом растворе хлорида натрия с помощью микроскопа. Препарат в этом растворе служит прежде всего для выявления вегетативных форм простейших, которые распознаются по характе­ру движения. Препарат суспензии каловых масс в растворе Люголя в основном используют для дифференцирования цист простейших.

Оценка результатов. Исследуют 2-3 препарата, отмечая всех замеченных про­стейших. В сомнительных случаях или при полу­чении отрицательного результата анализ повто­ряют; на протяжении 1-2 нед проводят не менее 3 анализов. Метод позволяет наряду с непатогенными простейшими выявить Enta­moeba histolitica и Balantidium coli, а также условно-патогенную Lamblia intestinalis.

Унифицированный метод с применением консервантов.

Принцип. Простейшие фиксируются в каловых массах консервирую­щим раствором, поэтому морфологические приз­наки простейших длительное время остаются без изменений.

Оценка результатов. Исследуют 2-3 препарата, отмечая всех обнаруженных простейших. Структуры простейших при приме­нении консервантов окрашиваются в синий цвет красителем. Внутренняя структура балантидиев в консервированном материале стано­вится незаметной, и балантидиев обнаруживают лишь по войлокообразному слою ресничек по периферии клетки.

Унифицированный метод формалин-эфирного обогащения.

Принцип. Формалин-эфирная обработка позволяет выделять и кон­центрировать цисты простейших.

Оценка результатов. При исследо­вании препарата отмечают всех обнаруженных простейших. Метод позволяет выявить цистные их формы. Основные формы простейших пред­ставлены ниже.


Класс корненожек (Shizopoda)

К классу корненожек относятся амебы. Характерной осо­бенностью вегетативной стадии этого одно­клеточного организма является отсутствие оболочки, вследствие чего тело не имеет постоян­ной формы. При неблагоприятных условиях тело амебы покрывается оболочкой и она превра­щается в цисту - устойчивую форму, способную сохранять жизнеспособность вне организма человека. В цисте ядро делится на 2-4-8 частей. Попав в кишечник человека, циста под влиянием пищеварительных ферментов осво­бождается от своей оболочки. Протоплазма ее делится с образованием одноядерных вегетатив­ных особей, количество которых соответствует числу ядер цисты.

Из паразитирующих в кишечнике человека амеб наиболее часто встречаются патогенная Entamoeba histolytica - возбудитель дизенте­рии и непатогенные Entamoeba hartmanni, Entamoeba coli, Endolimax папа, Jodamoeba buschlii.

Главная задача, возникающая при обнару­жении амеб,- различить патогенную дизенте­рийную от непатогенных форм. Поэтому лабора­торный работник должен быть знаком с морфо­логическими особенностями этих видов простейших.

Entamoeba histolytica.

В свежем нативном препарате дизентерийная амеба имеет вид почти бесцветного неопределенной формы комочка. Ядра в ней не видно. Протоплазма ясно делится на зоны: наружную - гомогенную эктоплазму и внутреннюю - эндоплазму. Первая примерно в 2 раза меньше второй.

При движении амебы псевдоподии возни­кают из эктоплазмы, а затем в образовавшееся выпячивание постепенно вливается эндоплазма. Характер движения является одной из типичней­ших особенностей дизентерийной амебы. Псевдо­подия выбрасывается ею мгновенно, а при перемещении в нее эндоплазмы движение стано­вится поступательным. Все это отличает дизентерийную амебу от кишечной, у которой нет деления на эндо- и эктоплазму; форма меняется очень медленно, и при образовании псевдоподий тело не перемещается в пространстве.

Е. histolytica встречается в кишечнике в двух формах: тканевой и просветной. Тканевая фор­ма, называемая также Е.histolytica forma mag­na, получила свое название вследствие того, что она проникает в ткани хозяина и, поселяясь там, вызывает изъязвление стенки кишечника. Ее встречают в кале при остром амебиазе. Размер этой амебы колеблется в значительных пределах (от 16 до 60 мкм). В состоянии покоя, когда форма тела приближается к округлой, размер ее 20-30 мкм, а в вытянутом состоянии длина может быть в 2 раза больше. Наличие в протоплазме амеб эритроцитов является очень важным диагностическим признаком, так как непатогеиные формы никогда их не содер­жат. Бактерии в протоплазме живой тканевой формы встречаются как исключение. Обычно они проникают в тело амебы только после ее гибели. Просветная форма, или Е.histolytica forma minuta, обитает в просвете кишечника (отсюда и ее название). В стенку кишечника она не внедряется, поэтому не вызывает ее изъязвления и соответствующей клинической картины. Про­светная форма амебы обнаруживается у лиц, выздоравливающих от острого амебиаза, у стра­дающих хронической формой заболевания и у носителей.

Отличия просветной формы от тканевой следующие: она меньше размером - обычно 12-25 мкм, изредка еще меньше. Движение совершается более медленно, хотя иногда наблюдается выбрасывание псевдоподий. В про­топлазме эритроцитов нет и содержится небольшое количество бактерий.

Цисты Е. histolytica правильной круглой формы, бесцветны, диаметр их в среднем 10- 12 мкм. Протоплазма слегка зерниста, ядра (1-4) без окраски плохо различимы. В некото­рых цистах можно заметить хроматоидные тела - короткие, бесцветные, сильно преломляю­щие свет палочки с закругленными концами, которым приписывается роль запасного пита­тельного материала. Эритроцитов цисты никогда не содержат.

В препарате, окрашенном раствором Люго­ля, можно обнаружить у цисты ясно различи­мую двухконтурную оболочку, ядра и гликогеновую вакуоль. Ядра выглядят как колечки, в центре которых в виде блестящей точки распо­ложена кариосома. Зрелая циста содержит 4 ядра. Хроматоидные тела не окрашиваются йодом.

Наиболее характерным признаком дизенте­рийной амебы является строение ее ядра. Оно имеет округлую форму с диаметром 3-8 мкм и располагается в эндоплазме эксцентрично. В центре ядра находится округлая или много­угольная, правильной формы, около 0,5 мкм в поперечнике, кариосома, окруженная светлой зоной. Пространство между кариосомой и обо­лочкой не содержит никаких зерен. Дизенте­рийную амебу необходимо отличать от обнару­живаемых в кишечнике непатогенных форм.

Entamoeba hartmanni - непатогенная аме­ба, имеющая наибольшее сходство с E.hisiolytica в строении тела, но отличающаяся значительно меньшей величиной. Вегетативные формы ее имеют размер от 5 до 12 мкм. Размер 4-ядерных цист - от 5 до 10 мкм. Движения ее совер­шаются медленно, эритроцитов она не фаго­цитирует.

Entamoeba coli - наиболее часто встречаю­щийся в кишечнике вид амеб. В нативном препа­рате вегетативная форма имеет размер 29-30 мкм в округлившемся состоянии и до 60 мкм в вытянувшемся. В протоплазме нет деления на эндо- и эктоплазму, она не содержит эритро­цитов. В больших щелевидных вакуолях имеется значительное количество разнообразных вклю­чений: бактерии, грибы, лейкоциты, крахмальные зерна, цисты других простейших. Движения медленные, не имеют поступательного характе­ра. В отличие от Е.histolytica ядро заметно и в нативном и еще лучше в окрашенном йодом препарате. Цисты E.coli круглой формы, крупнее цист дизентерийной амебы: их диаметр в сред­нем около 19-20 мкм. Двухконтурная оболочка толще, чем у Е. histolytica. Ядер от 1 до 8, они могут быть заметны и в неокрашенных препаратах, но лучше видны после окраски йодом.

Стадия 4-ядерной цисты очень кратковре- менна и поэтому наблюдается редко в отличие от Е. histolytica; нахождение 8-ядерных цист подтверждает их принадлежность к виду Е. coli. В связи с тем что ядра лежат в разных плоско­стях сферического тела цисты, то увидеть и правильно подсчитать их можно только, работая микрометрическим винтом. При окраске йодом можно заметить в ядре кариосому, а в прото­плазме незрелых (I-2-ядерных) цист - боль­шую гликогеновую вакуоль.

Endolimax nana - непатогенная амеба ма­лого размера (в среднем около 7 мкм). В препа­рате свежевыделенного кала при температуре человеческого тела (на нагревательном столике) движения ее довольно активны, напоминают движения Е. histolytica, но при остывании препарата они быстро прекращаются. Прото­плазма, делящаяся на эндо- и эктоплазму, ни­когда не содержит эритроцитов, в ее вакуолях заметно лишь большое количество включенных микробов. Ядро в нативном препарате незаметно.

Цисты круглой или чаще овальной формы размером 8-16X6-8 мкм содержат 1-4 ядра. Как в не окрашенном, так и в окрашен­ном йодом препарате их трудно отличить от мелких цист дизентерийной амебы.

Jodamoeba butschlii - непатогенная амеба размером от 8 до 20 мкм. Движения медленные, быстро прекращающиеся при остывании препа­рата,- Псевдоподии образуются из эктоплазмы; эндоплазма зернистая, ее вакуоли содержат бактерии, крахмал и другие частицы, но никогда в них нет эритроцитов. В неокрашенных препа­ратах ядро обычно незаметно, при окраске гема­токсилином оно довольно большого размера с тонкой оболочкой и большой кариосомой. По­следняя лежит в центре ядра, занимая примерно половину его, и окружена светлой зоной.

Более характерными особенностями отли­чаются цисты этой амебы. Они имеют различную, часто неправильную форму, довольно толстую двухконтурную оболочку и, как правило, одно ядро. Наиболее характерен их вид при окраске раствором Люголя. На фоне зеленовато-желтой протоплазмы резко выступает ясно контурированная большая гликогеновая вакуоль, интенсивно окрашенная в красновато-коричневый цвет. Она занимает около половины протоплазмы. Изредка гликогеновых вакуолей бывает 2 или 3.


Класс жгутиковых (Flagellata).

Lamblia intestinalis.

Лямблии, как и описываемые ниже трихомонады, относятся к классу жгутиковых. Общей особенностью последних является нали­чие на поверхности тела одного или нескольких жгутиков, с помощью которых они передвигаются. В отличие от амеб тело жгутиковых покрыто оболочкой, наличие которой обусловли­вает постоянство их формы.

Лямблии паразитируют в тонком кишечнике человека, преимущественно в двенадцатиперст­ной кишке, а также в желчном пузыре. Суще­ствование вегетативной особи лямблии требует жидкой среды, поэтому, попадая в толстый кишечник, лямблии инцистируются и в кале находятся только цисты. Лишь при профузных поносах или после действия сильных слабитель­ных с испражнениями могут быть выведены и вегетативные формы. Как правило, последние легко обнаруживаются в желчи при дуоденаль­ном зондировании.

Вегетативные формы лямблий при рассматри­вании их с передней поверхности имеют груше­видную форму, в профиль - ложкообразную. Это зависит от того, что на передней поверх­ности тела паразита имеется вдавление, пред­ставляющее собой присоску, с помощью которой он прикрепляется к клеткам кишечного эпителия. Питаются лямблии осмотически всей поверх­ностью тела. Длина последнего 10-20 мкм, ширина 8-10 мкм.

Живые лямблии находятся в состоянии непрерывного движения, преимущественно колебательного, осуществляемого четырьмя па­рами жгутиков. Несмотря на то, что в нативном препарате внутреннее строение лямблии нераз­личимо и жгутики едва заметны вследствие быстрого их мелькания, облик паразита, особен­но движущегося, настолько характерен, что спутать его ни с чем невозможно. Поэтому для диагностики, как правило, достаточно рас­смотрения нативного препарата.

На окрашенных препаратах выявляется довольно сложное внутреннее строение лямблий. Они полностью билатерально симметричны. Посередине тела по его длине проходят два параллельных нитевидных опорных образова­ния - аксостили. По обе стороны от них сим­метрично расположены 2 ядра и 4 пары блефаробластов - точечных телец, от которых отходит такое же число жгутиков. Имеется только одно непарное образование - парабазальное тело, отходящее в форме запятой от середины аксо- стиля; назначение его неизвестно.

При исследовании кала наиболее важно уметь обнаружить и отличить цисты лямблий, обнаружение которых позволяет нередко поста­вить диагноз лямблиоза без дуоденального зондирования. В нативном препарате цисты лямблий выглядят овальными, реже круглыми, бесцветными, светопреломляющими образова­ниями длиной 10-14 мкм с двухконтурной прозрачной оболочкой.

Более ясная картина получается при окраске раствором Люголя. В таком препарате ясно видны оболочка цисты, аксостиль, 2 или 4 ядра, лежащие у одного из полюсов, блефаробласты, жгутики. Все это образует сложный, но характер­ный рисунок.

Trichomonas hominis.

Кишечные трихомона­ды во многом похожи на влагалищные. Они имеют овальную или грушевидную форму, длина их 10-15 мкм. На переднем коние тела расположены 3-5 жгутиков, на заднем - один. От переднего конца к заднему тянется ундулирующая перепонка, которая находится в непре­рывном движении, по ней как бы пробегают одна за другой волны, начинающиеся у передне­го конца. Благодаря жгутикам и ундулирующей перепонке тело паразита находится в непрерыв­ном движении: то поступательном, то колеба­тельном, то вращательном. Движение ундули­рующей перепонки хорошо заметно в нативном препарате под большим увеличением микроско­па и позволяет определить вид простейшего. Цист трихомонада не образует. Вопрос о патогенности кишечных трихомонад окончательно не решен.

Chilomastix mesnili - непатогенный жгути­коносец, грушевидной формой тела напоминаю­щий трихомонады. Отличается от последних отсутствием ундулирующей перепонки, наличием спиральной борозды, проходящей через все тело от переднего конца к заднему. Жгутиков четыре, расположены они у переднего конца, три из них направлены кпереди и обусловливают быстрое вращательное движение простейшего, и один жгутик лежит вдоль ротового отверстия. По­следнее находится в переднем конце и по длине равно 1/3-1/2 тела. Длина Chilomastix mesnili 13-24 мкм, ширина 6-10 мкм. На окрашен­ном препарате видно круглое ядро, расположен­ное в передней части тела, с несколькими зернами хроматина и одной кариосомой. В прото­плазме много пищевых вакуолей, наполненных бактериями. Аксостиля нет. Цисты формой напоминают лимон размером 7-9 X 5-6 мкм. В окрашенных йодом цистах видны одно ядро, извивающийся жгутиковый аппарат и фибрил­лы, окаймляющие цнтостом.

Класс ресничных (Ciliata).

Balantidium coli.

Балантидий - единственная ресничная инфузо­рия, паразитирующая в кишечнике человека и вызывающая заболевания различной тяжести - от легких Колитов до тяжелых язвенных пора­жений. Встречается и носительство у здоровых людей. В. coli - самый крупный из обнаружи­ваемых в кишечнике человека простейших орга­низмов. Размер его овального тела 50-90 × 30-65 мкм, однако встречаются особи, дости­гающие 150-200 мкм.

Эту инфузорию вследствие больших разме­ров легко увидеть и отличить даже под малым увеличением микроскопа благодаря ее большой подвижности. Передвижение В. coli, совершае­мое с помощью ресничек, настолько быстрое, что паразит то и дело исчезает из поля зрения и препарат приходится передвигать, чтобы за ним уследить. Подвижность его сохраняется довольно долго и после остывания кала.

Для обнаружения вегетативных форм В. coli обычно используют нативный препарат. Форма тела В. coli яйцевидная, несколько суженная к переднему концу, где помещается воронко­образное углубление - перистом играющее роль рта и пищевода. Все тело инфузории покрыто ресничками, располагающимися парал­лельными рядами, идущими по длине тела несколько наискосок. Перистом также покрыт ресничками, загоняющими внутрь его пищевые частички. В средней части тела расположено большое бобовидной формы ядро -макро­нуклеус, в углублении которого лежит малень­кий пузырьковидный микронуклеус (они лучше видны на окрашенных препаратах). В прото­плазме имеются 2, (реже 1-3) пульсирующие сократительные вакуоли, служащие примитив­ными органоидами выделения, а также несколь­ко пищеварительных вакуолей, содержащих бактерии, эритроциты, лейкоциты, зерна крах­мала и другие продукты питания паразита.

В. coli образует цисты сферической формы диаметром 50-60 мкм. Они покрыты бесцветной двухконтурной оболочкой. В окрашенных препа­ратах у них виден макронуклеус и одна сократи­тельная вакуоль (нефункционирующая).


Класс споровиков (Sporozoa).

Blastocystis hominis. В кале нередко встречается образо­вание, похожее на цисты простейших и могу­щее быть принято за них. Это бластомицет (гриб) Blastocystis hominis. Он обнаруживается чаще в жидком, чем нормальном, кале, но явля­ется, по-видимому, безвредным обитателем кишечника, Бластоцисты легко отличить от цист простейших при окраске йодом. Они имеют почти правильную круглую форму, различную величину - от 5 до 30 мкм в диаметре. Вся центральная часть их тела занята большой вакуолью - гомогенной, круглой, не окраши­вающейся йодом. Протоплазма оттеснена к пе­риферии и окружает вакуоль тонким слоем в виде кольца.


Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Меньшиков В.В. М.: Медицина, - 1987 год - 368 с.

Показания к исследованию: 
  • Подозрение на наличие протозооноза (лямблиоз, амебиаз и т.п.)
  • Эпидемиологические обследования.